NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型
NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型試劑盒 VS0979
NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區(qū)域，因為支原體的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經(jīng)染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的最大激發(fā)波長為346nm，最大發(fā)射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，最大激發(fā)波長為352nm，最大發(fā)射波長為461nm。
操作步驟：
貼壁細胞：
1.被檢細胞接種于無菌的6孔細胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。
2.5天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1ml的固定液，靜置20min，
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
懸浮細胞：
1.收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。
2.將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
結果判斷（參考）：
陰性：僅見細胞的細胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽性：除細胞外，細胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項：
1.Hoechst工作液對人體有害，請注意防護。
2.固定液有刺激性氣味，建議在通風櫥進行固定。
3.支原體檢測時，最好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2～3代，這樣容易避免假陰性結果。
4.本試劑盒用于6孔板檢測時，可以進行50次檢測反應。
5.檢測支原體污染，可以使用支原體高效Vero細胞，這樣可以提高檢測靈敏度，即將被檢測樣品接種于Vero細胞進行檢測。
NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型
